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熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)有哪些特點(diǎn)
熒光分光光度計和紫外分光光度計屬于一類產(chǎn)品,其結(jié)構(gòu)由激發(fā)光源、單色器、樣品室、光電倍增管和讀出(記錄)裝置組成。但它們的光源不同。熒光分光光度計多采用高壓汞燈、氙燈和激光光源。同時,熒光測量大多采用激發(fā)光和發(fā)射光成直角的光路,儀器元件的排列方式不同。
(1)激發(fā)光源:光源強(qiáng)度高于吸收法。
汞燈:發(fā)射強(qiáng)度高且穩(wěn)定,不需要復(fù)雜的電源,但譜線不連續(xù),數(shù)量少。它主要用于過濾熒光計。
碘鎢燈:提供連續(xù)光譜300~700mn。
氙燈:發(fā)射光線強(qiáng)度高,譜線連續(xù),分布在200~700 nm光域,在300~400 nm波段光線強(qiáng)度幾乎相等,但燈的電源需要大電源,而且電源穩(wěn)定,所以電源結(jié)構(gòu)復(fù)雜。
激光:發(fā)光強(qiáng)度高,可大大提高熒光分析的靈敏度。
(2) 樣品池:通常由石英池(用于液體樣品)或固體樣品架(用于粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角布置;測量固體時,光源與檢測器呈銳角排列。在低溫?zé)晒鉁y量中,將裝有液氮的透明石英真空瓶覆蓋在樣品池中。
(3) 單色儀:熒光光譜儀通常有兩個濾光片:濾光片位于光源和樣品池之間,濾除不需要的光,讓需要的激發(fā)光通過。第二個濾光片位于樣品池和檢測器之間,濾除來自溶劑的散射光、來自容器表面的散射光、雜質(zhì)發(fā)出的光等,讓物質(zhì)發(fā)出的熒光被測試通過。
熒光分光光度計通常有兩個光柵,與濾光片位置相同,單色性好。
(4)檢測器:由于熒光通常較弱,采用光電倍增管作為檢測器,靈敏度高。選擇光電倍增管時,請考慮:響應(yīng)波長、靈敏度和聲音電平。藍(lán)色敏感管適用于蛋白質(zhì)和核酸的測量,而紅色敏感管適用于熒光染料的檢測。
(5)顯示系統(tǒng):燈光秤、計算機(jī)操作系統(tǒng)等